Study on the Anti-aging Effect of Cherry Ethanol Extract Based on Caenorhabditis elegans Model
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摘要: 本文以胶东地区常见的两种樱桃品种—红灯和黄蜜为研究对象，探究并比较了樱桃的抗衰老作用，为樱桃的进一步开发利用提供依据。对两种樱桃的果肉和果核分别进行醇溶提取并初步明确成分，以DPPH自由基和羟自由基清除能力为指标评价四种成分的抗氧化活性并探究其抑制β淀粉样蛋白(Aβ）聚集的能力。以秀丽隐杆线虫为模型，测定四种成分对其寿命、运动能力、生殖能力、瘫痪缓解能力的作用效果和抑制Aβ沉积情况。结果表明：两种樱桃果肉的抗氧化活性突出，样品浓度在1 mg/mL时，黄蜜和红灯的DPPH自由基清除率分别为80.88%和83.19%，羟自由基清除率分别为88.19%和92.85%。果核相对较低，黄蜜和红灯的DPPH自由基清除率分别为20.76%和44.93%，羟自由基清除率分别为28.65%和38.75%。四种样品均对Aβ表现出抑制作用，且在线虫实验中，与空白组相比，四种样品组的线虫寿命能够延长2~4 d，增强其运动能力，对生殖能力无损害且降低线虫瘫痪率，减少Aβ沉积。综上，四种样品能够通过清除自由基，抑制Aβ的产生从而产生一定的抗衰老效果，具有潜在的应用价值。Abstract: In this paper, the anti-aging effects of two varieties of cherry, Red Light and Yellow Honey in Jiaodong region were investigated and compared , for further development and utilization of cherries. The components of pulp and kernels in the two kinds of cherries were extracted by ethanol and the antioxidant activity was evaluated by the scavenging ability of DPPH and hydroxyl radicals, the ability to inhibit the aggregation of β-amyloid protein (Aβ) was investigated. The effects of four components on the life span, locomotor ability, reproductive ability, paralysis relief ability and the inhibition of Aβ deposition of Caenorhabditis elegans were studied. The results showed that antioxidant activity of two cherry pulp was outstanding, with DPPH radical scavenging rates of 80.88% and 83.19% and hydroxyl radical scavenging rates of 88.19% and 92.85% for Yellow Honey and Red Light, respectively, when the sample concentration was 1 mg/mL. While the antioxidant activity of fruit kernels was relatively low, with DPPH and hydroxyl radical scavenging rates of Yellow Honey and Red Light were 20.76% and 44.93%, 28.65% and 38.75%, respectively. Compared with the blank group, the life span of Caenorhabditis elegans in the four groups was prolonged by 2~4 days and their locomotor ability was enhanced, and it did not damage the reproduction ability and reduced the paralysis rate of Caenorhabditis elegans and Aβ deposition. In conclusion, the four samples were able to produce certain anti-aging effects by scavenging free radicals and inhibiting the production of Aβ, which have potential applications.
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Keywords:
- cherry /
- antioxidant /
- beta-amyloid /
- anti-aging /
- Caenorhabditis elegans
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樱桃（Prunus pseudocerasus），享有“早春第一果”的美誉[1]，因其抗氧化和抗炎活性而获得越来越多的学者和公众关注，有不少学者对不同樱桃品种进行了理化成分、氧化活性等方面的分析[2-4]，发现樱桃果皮与果肉中富含的天然多酚类、黄酮类活性物质，具有很高的抗氧化、抑菌、消炎、清除自由基等能力[5]。有学者报道樱桃多酚能够减轻炎症症状以及降低炎症相关因子水平[6]，对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎有保护作用。樱桃黄酮也有抗氧化、消炎和降尿酸等效果[7]。樱桃核可以抑制α-葡萄糖苷酶和脂肪酶的活性，具有降糖降脂功效、抗疲劳、耐缺氧和镇痛等作用[8-9]。所以本文以胶东地区两种主要的樱桃鲜食品种-红灯樱桃和黄蜜樱桃的果肉和果核作为研究对象进行相关研究。
目前，对这两种樱桃的抗衰老效果鲜有研究。国内外仅对红灯樱桃果肉的多酚提取物进行了相关研究[10]，并无黄蜜樱桃和两种果核的抗衰老研究。因此，本文对红灯和黄蜜两种樱桃的果肉和果核进行醇溶提取并初步明确成分，测定其体外抗氧化活性和抑制Aβ聚集的能力，同时体内利用秀丽隐杆线虫模型，从线虫行为学等层面，研究两种樱桃的抗衰老作用并初步探讨其抗衰老作用机制，旨在为后续樱桃抗衰老活性相关研究提供一定理论依据，为樱桃资源进一步研究与开发利用提供参考。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
两种达到食用成熟度的樱桃—黄蜜、红灯 2020年5月于青岛当地购买；芦丁标准品、没食子酸标准品、福林酚、抗坏血酸、DPPH 北京索莱宝科技有限公司；胰蛋白胨、酵母提取物、琼脂粉 OXOID公司；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氢氧化钠 天津市巴斯夫化工有限公司；碳酸钠、胆固醇、硫酸镁、氯化钙、亚硝酸钠、硝酸铝 天津市北联精细化学品开发公司；秀丽隐杆线虫株系CL4176和大肠杆菌株系OP50（尿嘧啶渗漏突变株） 美国线虫中心（Caenorhabditis Genetics Center）；96孔酶标板 美国Corning公司；硫磺素T 上海创赛科技有限公司；Aβ 美国EZBiolab公司。
FD-1D-80型SIM冷冻干燥机 北京中科星宇商贸中心；TGL-16M高速台式冷冻离心机 湘仪离心机仪器有限公司；WFZUV-2000分光光度计 尤尼柯（上海）仪器有限公司；LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌锅 上海申安医疗器械厂；DHP-9032型电热恒温培养箱 龙口市先科仪器公司；生物显微镜 日本Olympus株式会社；Spark多功能酶标仪 TECAN（奥地利）公司。
1.2 实验方法
1.2.1 原料处理和乙醇提取
两种樱桃洗净，沥干，分离果肉和果核，分别经−20 ℃预冻24 h后，在真空冷冻干燥机中干燥2 d（−54 ℃），粉碎研磨，过60目筛4 ℃保存备用。取保存好的樱桃粉末，95%乙醇（料液比1:10）浸泡24 h后进行超声处理，超声时间2 min，超声功率100 W。超声结束以4000 r/min，离心5 min，取上清过滤，倒于圆底烧瓶在60 ℃下旋转蒸发至干，得到四种样品乙醇提取物[11]，4 ℃保存备用，红灯果肉醇提物记为RP，红灯果核醇提物记为RC，黄蜜果肉醇提物记为YP，黄蜜果核醇提物记为YC。
1.2.2 提取物中总多酚和总黄酮含量的测定
1.2.2.1 标准曲线的绘制
芦丁标准曲线：准确称取芦丁对照品10 mg置于25 mL容量瓶，用30%乙醇定容刻度，即得对照品储备液。分别吸取储备液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于10 mL容量瓶，加入30%乙醇5 mL，5%亚硝酸钠0.3 mL，振摇放置5 min，加入10%硝酸铝0.3 mL摇匀放置6 min，加入1 mol/L氢氧化钠2 mL，最后30%乙醇定容至10 mL，室温放置10 min，于510 nm处测定吸光度。
没食子酸标准曲线：准确称取没食子酸对照品5 mg置于50 mL容量瓶，用蒸馏水定容刻度，即得对照品储备液。吸取没食子酸标准溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4 、0.5 mL，分别置于10 mL容量瓶，加入6 mL水，0.5 mL Folin-酚试剂，1.5 mL 20%Na2CO3溶液，用蒸馏水补足，混匀，75 ℃水浴10 min，于760 nm处测定吸光度[12-13]。
1.2.2.2 提取物中总多酚、总黄酮含量的测定
分别称取适量样品提取物配制溶液，按1.2.2.1方法测定吸光度，依据线性回归方程计算两种樱桃中总黄酮、总多酚的含量。
式中：c表示根据吸光度值计算出的溶液质量浓度，mg/mL；V表示供试品溶液体积，mL；D表示稀释倍数；m表示样品提取量，g。
式中：c表示根据吸光度值计算出的溶液质量浓度，mg/mL；V表示供试品溶液体积，mL；D表示稀释倍数；m表示样品提取量，g。
1.2.3 体外抗氧化活性的测定
1.2.3.1 清除DPPH自由基能力的测定
参照文献[14]方法，准确称量四种样品乙醇提取物，用乙醇配制浓度为0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.5 mg/mL的样品液，取各样品液0.5 mL，加入0.2 mmol/L DPPH 1.2 mL，用无水乙醇补足至4 mL，充分混匀，在黑暗处静置反应30 min，于517 nm处测定吸光度。根据公式计算清除率：清除率（%）=[1−（A样品−A样参）/A对照]×100，以VC为阳性对照。
1.2.3.2 清除羟自由基（·OH）活性的测定
参照文献[15]方法，准确称量四种样品乙醇提取物，用乙醇配制浓度为0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.5 mg/mL的样品液，取各样品液1 mL，加入0.15 mol/L PBS（pH7.4）3.25 mL和7.5 mmol/L邻二氮菲0.25 mL，充分混匀后，加入7.5 mmol/L FeSO4 0.25 mL，迅速混匀后加入0.1%的H2O2 0.25 mL，37 ℃水浴90 min，于536 nm下测定吸光度，根据公式计算清除率，清除率（%）=[（A样品−A样参−A损伤）/（A未损伤−A损伤）]×100，以VC为阳性对照。
1.2.4 ThT荧光检测Aβ聚集
1.2.4.1 Aβ的预处理
根据已有文献[16-17]制备Aβ寡聚体溶液，用六氟异丙醇（HFIP）将Aβ溶解至1 mg/mL，于4 ℃反应2 h，干燥，−80 ℃冻存。使用时，先用二甲基亚砜（DMSO）溶解，使DMSO终浓度为2%v/v（DMSO/PBS），Aβ浓度为10 µmol/L。
1.2.4.2 ThT荧光检测Aβ聚集
称取四种样品提取物10 mg，加入2%v/v（DMSO/PBS）溶液9 mL得样品溶液，后与上述制备得到的Aβ溶液9:1混合于37 ℃共同孵育。在不同的时间（0、7、14、21、28、35 h）分别吸取20 μL混合溶液，加入180 µL 5 μmol/L的ThT溶液（溶剂为PBS）中，以单独孵育的Aβ作为空白对照，混匀后置于多功能酶标仪测定其荧光强度[18]。设定激发波长为450 nm，发射波长为480 nm，测荧光强度。每个样品测3孔，取平均值，重复三次[19]。
1.2.5 线虫模型抗衰老研究
1.2.5.1 线虫培养和同期化
线虫的培养使用线虫生长培养基（nematode growth medium，NGM），线虫食物为大肠杆菌OP50，涂布培养基后于16 ℃恒温恒湿培养箱中培养[20]。线虫活化三代后生长至L4期作为同期化处理模型，体内活性实验将选定一个合适质量浓度作为樱桃提取物的应用浓度。产卵同期化：在光学显微镜下将产卵期线虫挑至含有大肠杆菌OP50的培养基表面，产卵时间1~3 h，产卵约100个左右，挑出成虫，将含虫卵培养基置于16 ℃恒温培养箱中培养，同期化3~4 d至线虫生长L4期。此时的线虫处于同一生长时期随后用于实验，四个实验组均以1 mg/mL的含有样品提取物的OP50菌液涂布培养基，空白组（NC）以不含样品提取物的OP50菌液涂布培养基，以此比较判定每种样品效果。
1.2.5.2 线虫寿命测定
将产卵期的秀丽线虫挑至涂有提取物的培养基上进行产卵同期化，待线虫孵化生长至L4期后23 ℃高温（升温培养可加速线虫衰老，缩短生命周期）诱导24 h，记录存活情况，通过剔除死亡线虫的方式每天计数死亡、丢失和存活线虫的条数，直至所有线虫死亡完全[21]。
1.2.5.3 线虫运动能力测定
以线虫头部摆动次数作为衡量标准，记录涂有样品培养基的同期化生长线虫30 s内线虫头部摆动的次数，每天记录运动次数，直至线虫停止摆动。
1.2.5.4 线虫生殖能力测定
记录每天空白组和样品组线虫产卵情况，产第一颗卵的时间记为生殖能力实验第1 d。后每24 h将线虫转至新板，记录每天线虫产卵数量，直至线虫停止产卵。
1.2.5.5 瘫痪缓解实验
线虫在23 ℃高温诱导条件下易出现瘫痪麻痹症状，反应体内Aβ聚集的毒性作用。当外界刺激线虫身体不再弯曲或蠕动，仅头部摆动即视为瘫痪，记录每天线虫的非瘫痪率。将23 ℃诱导24 h后的日期记为瘫痪实验第1 d，每24 h计数一次瘫痪条数并挑出，直至瘫痪完全。
采用硫黄素T（ThT）荧光染色法测定了秀丽线虫体内Aβ的沉积情况。参考文献[22]，将同期化处理的秀丽线虫16 ℃培养48 h，接着转移至23 ℃培养36 h后将线虫用M9缓冲液冲洗至EP管中，反复冲洗3次，离心机4200 r/min，离心2 min，去上清。加入4%多聚甲醛固定过夜。用1 mL PBS缓冲液冲洗后加入150 µL含5%-巯基乙醇、125 mmol/L Tris-HCl（pH7.4）和1% Triton-100溶液于37 ℃中反应24 h。然后用PBS缓冲液洗涤3次并用含50%乙醇的0.125% ThT染色2 min，再用50%乙醇连续洗涤脱色，置于显微镜下观察。
1.3 数据处理
所有样品的测定重复进行三次；使用Orgin 9.1和GraphPad进行数据分析并作图，使用SPSS 18.0版通过单因素方差分析对三个独立实验进行统计分析，显著性水平（P<0.05）的概率值由邓肯多重范围检验接受，数据以平均值±标准偏差来表述。
2. 结果与分析
2.1 四种样品醇提物中总多酚、总黄酮的含量
多酚和黄酮类物质均具有一定的抑制氧化反应、清除自由基、抑菌以及抗衰老等一系列作用[23-24]。由实验得没食子酸标准曲线线性回归方程式：Y=0.2543X−0.0006，R2=0.9996，其中Y代表吸光值，X代表没食子酸标准液浓度（mg/mL）。由图1可知，不同种类樱桃总多酚含量有显著性差异（P<0.05），RP中多酚含量最多，为253.91±20.32 mg/g，其次从高到低依次是YP：190.64±18.49 mg/g、RC：110.63±4.54 mg/g、YC：60.03±12.01 mg/g。
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图 1 四种样品醇提物中总多酚和总黄酮含量注：图中不同小写字母表示差异显著 P<0.05；图7同。Figure 1. Total polyphenols and total flavonoids in four sample ethanol extracts由实验得芦丁标准曲线线性回归方程式：Y=0.213X−0.0037，R2=0.9990，其中Y代表吸光值，X代表芦丁标准液浓度（mg/mL）。由图1可知，不同种类樱桃总黄酮含量有显著性差异（P<0.05），红灯樱桃的总黄酮含量比黄蜜樱桃的要高，且相对应品种的总黄酮含量果核要高于果肉的。其中，RC中总黄酮含量最高，为431.84±21.38 mg/g，YP中总黄酮含量最低，为342.76±3.39 mg/g。
2.2 体外抗氧化活性测定
机体的抗氧化能力与活性氧自由基息息相关。活性氧自由基升高，产生各种过氧化因子，从而触发过氧化反应，诱导细胞内物质发生过氧化并引起细胞凋亡，进而加速了衰老进程[25]。所以本实验进行清除DPPH自由基和羟自由基（·OH）能力测定。
在0~1.5 mg/mL范围内，两种樱桃果肉和果核不同浓度的醇提物具有清除DPPH自由基和羟自由基（·OH）的能力。果肉醇提物抗自由基活性均高于果核，且清除率从高到低为RP>YP>RC>YC。高帆等[26]对5个甜樱桃品种的酚类物质含量和抗氧化能力进行相关性分析，证明甜樱桃果实中酚类物质与抗氧化活性显著相关，且总酚对抗氧化活性的影响最大。结合图1中数据，判定出现图2中结果可能是总酚发挥主要抗氧化活性作用，具体作用机制还需进一步研究。
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图 2 四种样品醇提物清除DPPH能力和羟自由基（·OH）能力Figure 2. The ability of four sample ethanol extracts extracts to scavenge DPPH and hydroxyl radicals (·OH)2.3 ThT荧光检测四种样品提取物对Aβ聚集的影响
Aβ的过度产生和聚集会诱使氧化稳态失衡，产生大量的自由基及其所诱导的脂质过氧化物，从而破坏机体抗氧化系统的平衡，对机体造成损伤，加速机体衰老[27]。ThT是一种用于检测具有β-折叠结构的纤维聚集体的荧光染料，其荧光强度与β-折叠含量成正比[28]。结果如图3所示，Aβ1-42单体溶液在37 ℃单独孵育时，ThT荧光强度逐渐增加，该过程说明Aβ1-42单体随着时间推移转化成含β-折叠结构的聚集体。然而，当Aβ1-42单体分别与四种样品溶液共同孵育后，虽然ThT荧光强度也会随着时间逐渐增加，但荧光强度要明显低于Aβ1-42单独孵育时的相应强度，说明四种样品醇提物能够抑制Aβ聚集。以四个样品组35 h的ThT荧光强度相较于Aβ1-42单体单独孵育强度差异显著（P<0.05），其中，RP效果最好，比空白组降低了47.65%，其次依次为YP、RC、YC，分别降低了42.26%、23.74%和16.69%。出现上述结果可能是由于与RP多酚含量最高有关，因为根据“π-stacking”理论，多酚类化合物的苯环可能竞争性地与Aβ的芳香基团发生作用，阻止Aβ单体间π-π相互作用。此外，多酚类化合物还可以通过疏水性相互作用抑制淀粉样纤维的生长[29]。
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图 3 ThT荧光检测四种样品醇提物对Aβ的聚集影响注：具有不同侧标的数据之间具有显著性差异，P<0.05。Figure 3. ThT fluorescence detection of the effect of four sample alcohol extracts on the aggregation of Aβ2.4 对秀丽隐杆线虫抗衰老的效果
秀丽隐杆线虫是一种体型小、繁殖快、生命周期短、易于操作、遗传途径明确及神经系统简单但完善的模型生物[30]，且有60%~80%的基因同人类基因同源[31]。线虫随着生长周期的增加，会表现出行为迟钝、生理功能下降等现象，所以成为研究衰老过程的理想模型[32-33]。
2.4.1 寿命测定结果
寿命是确定秀丽隐杆线虫衰老程度的直接指标。如图4所示，与空白组相比，四种样品提取物在一定程度上延长了秀丽隐杆线虫的平均寿命。其中，RP组寿命最长，比空白组延长约17.14%。推测是因为RP组的总多酚中花青素含量较高[34]。WEI等 [35]指出甜樱桃果实的红色主要归功于花青素，花青素具有良好的抗衰老效果[36-38]。因果核中的总黄酮也具有一定的抗氧化效果[39]，所以，虽然两种样品的果核提取物延长线虫存活时间相对较短，但整体存活率仍高于空白组。综上，四种醇提物有一定的抗衰老效果且果肉提取物的效果更加明显。
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图 4 四种样品醇提物对秀丽隐杆线虫寿命的影响Figure 4. Effects of four sample alcohol extracts on the lifespan of Caenorhabditis elegans2.4.2 运动能力测定
线虫体内Aβ聚集会导致线虫的神经性病变，进而衰老使运动能力下降，可以通过测定线虫运动能力来判断提取物的抗氧化和抗衰老情况。线虫的衰老伴随着运动能力的下降。结果如图5所示，与空白组相比较，各组线虫的头部摆动频率均有所提高，摆动次数由高到低分别是RP、YP、RC、YC，与线虫寿命数据基本相符。图中第2 d是由于线虫经过耐受期，成长期间表现更为活泼，头部摆动次数增加，而后续随诱导温度升高、时间延长，体内Aβ聚集和自由基的大量产生，导致线虫日渐衰老，摆动频率逐渐降低。
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图 5 四种样品醇提物对秀丽隐杆线虫运动能力的影响Figure 5. Effects of four sample alcohol extracts on motility of Caenorhabditis elegans2.4.3 生殖能力测定
线虫衰老会导致生理功能的衰退，生殖能力的降低与衰老密切相关。生殖能力的测定主要是通过判断提取物对线虫子代数目的影响从而来评判样品在抗氧化的同时是否会对秀丽线虫的子代产生抑制作用。结果如图6所示，与空白组相比，红灯果肉组在第1、2 d产卵量有显著性差异（P<0.05），黄蜜果肉组只有第2 d有显著性差异（P<0.05），而其他组均无出现显著性差异（P>0.05），但可以从图中看出，总产卵量四种样品均高于空白组。这说明，在高温不利线虫生长条件下，样品不影响线虫的生殖能力且适当促进了线虫的生殖。
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图 6 四种样品醇提物对秀丽隐杆线虫生殖能力的影响注：*表示与同一天空白组相比具有显著性差异，P<0.05。Figure 6. Effects of four sample alcohol extracts on reproductive capacity of Caenorhabditis elegans2.4.4 瘫痪缓解能力测定
秀丽隐杆线虫瘫痪出现的主要病理变化是Aβ的大量沉积，引起老年神经退行性病变与衰老密切相关。所以通过观察线虫瘫痪情况判断样品是否具有抗衰老效果[40]。由图7可知，因高温诱导，瘫痪率逐渐增高，空白组每天的瘫痪率与四个样品组相比均具有显著性差异（P<0.05），且红灯果肉抗瘫痪效果最好，黄蜜果肉次之，两种果核最差。由图8可看出，空白组（A）线虫中出现β-蛋白沉积，而样品组（B）中几乎不出现。有相关研究证明，酸樱桃的提取物（多酚类）保护了神经元的损失，减少了星形胶质细胞和小胶质细胞的激活，减轻了Aβ的沉积[41]。结合图中数据，说明四种样品提取物在一定程度上能够减少Aβ的聚集，缓解线虫瘫痪，起到一定的抗衰老效果。
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图 7 四种样品醇提物对秀丽隐杆线虫瘫痪的影响Figure 7. Effects of four sample alcohol extracts on paralysis of Caenorhabditis elegans![]()
图 8 四种样品醇提物对秀丽隐杆线虫体内Aβ蛋白沉积情况的影响（20 µm）注：A：Aβ蛋白在空白组线虫体内沉积情况；B：Aβ蛋白在样品组线虫体内沉积情况。Figure 8. Effect of alcoholic extracts of four samples on the deposition of Aβ protein in Caenorhabditis elegans (20 µm)3. 结论
本文对四种样品醇提物成分测定，发现醇提物的总多酚含量是两种果肉均高于果核，总黄酮含量是两种果核均高于果肉，抗氧化活性和抑制Aβ作用都是果肉更为明显。其次以秀丽隐杆线虫为模型的实验发现，与空白组相比，四种样品组线虫寿命能够延长约2~4 d，产卵量增加约11.25%~40.59%，能增强线虫运动能力，减缓线虫瘫痪，具有一定的抗衰老效果。相比较之下，果肉的抗衰老效果比果核更加明显，就种类而言，红灯樱桃的效果优于黄蜜樱桃。出现上述结果的原因可能是总多酚发挥主要作用，具体作用机制还需进一步研究。目前对本文两种樱桃抗衰老研究较少，黄蜜樱桃果肉和两种樱桃核暂无抗衰老相关研究。本文不仅为上述两种樱桃和樱桃核对抗衰老功效提供了实验依据，同时对樱桃核的研究，旨在减少樱桃的资源浪费，增加樱桃的经济附加值，为樱桃资源的深度开发提供一定参考。
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图 1 四种样品醇提物中总多酚和总黄酮含量
注：图中不同小写字母表示差异显著 P<0.05；图7同。
Figure 1. Total polyphenols and total flavonoids in four sample ethanol extracts
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图 2 四种样品醇提物清除DPPH能力和羟自由基（·OH）能力
Figure 2. The ability of four sample ethanol extracts extracts to scavenge DPPH and hydroxyl radicals (·OH)
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图 3 ThT荧光检测四种样品醇提物对Aβ的聚集影响
注：具有不同侧标的数据之间具有显著性差异，P<0.05。
Figure 3. ThT fluorescence detection of the effect of four sample alcohol extracts on the aggregation of Aβ
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图 4 四种样品醇提物对秀丽隐杆线虫寿命的影响
Figure 4. Effects of four sample alcohol extracts on the lifespan of Caenorhabditis elegans
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图 5 四种样品醇提物对秀丽隐杆线虫运动能力的影响
Figure 5. Effects of four sample alcohol extracts on motility of Caenorhabditis elegans
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图 6 四种样品醇提物对秀丽隐杆线虫生殖能力的影响
注：*表示与同一天空白组相比具有显著性差异，P<0.05。
Figure 6. Effects of four sample alcohol extracts on reproductive capacity of Caenorhabditis elegans
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图 7 四种样品醇提物对秀丽隐杆线虫瘫痪的影响
Figure 7. Effects of four sample alcohol extracts on paralysis of Caenorhabditis elegans
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